雜交瘤技術(shù)概述 - Creative Biolabs

“Creative Biolabs 致力于以品質(zhì)提供高度定制化的綜合解決方案，以推進(jìn)全球客戶的研究項(xiàng)目。"

1975年，Kohler 和 Milstein 開發(fā)了雜交瘤技術(shù)。該技術(shù)將產(chǎn)生抗體的 B 細(xì)胞與永生性癌細(xì)胞系融合，從而創(chuàng)建出能夠無限期產(chǎn)生抗體的永生化雜交瘤細(xì)胞系。雜交瘤技術(shù)是現(xiàn)代研究中應(yīng)用廣泛的技術(shù)之一。

針對(duì)不同研究目標(biāo)，研究人員會(huì)采用多樣化的免疫策略來獲取 B 細(xì)胞。當(dāng)動(dòng)物的血清中產(chǎn)生足量抗體后，將對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化。

取出已處死動(dòng)物的脾臟，并在無菌條件下分離活化的 B 細(xì)胞。通過 ELISA 等檢測(cè)方法鑒定血清中由活化 B 細(xì)胞產(chǎn)生的抗體。隨后，將這些活化的 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。

在細(xì)胞融合前幾周，需在 8-氮雜鳥嘌呤中培養(yǎng)轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞，以獲得次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）基因功能缺失的骨髓瘤細(xì)胞（這是雜交瘤技術(shù)的方法）。

細(xì)胞融合是將活化的 B 淋巴細(xì)胞與 HAT 敏感型骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合的過程。在此步驟中，將新鮮獲取的活化 B 細(xì)胞與 HAT 敏感型骨髓瘤細(xì)胞在促融介質(zhì)中離心混合。電融合是另一種融合方法，即細(xì)胞在電場(chǎng)作用下發(fā)生融合。

即使采用高效的融合技術(shù)，也只有 1–2% 的細(xì)胞能成功形成雜交瘤細(xì)胞。因此，雜交瘤篩選至關(guān)重要。目前的篩選主要是在 HAT 培養(yǎng)基中孵育細(xì)胞混合物 10–14 天。在此過程中，氨基蝶呤的存在阻斷了細(xì)胞通過從頭合成途徑合成核苷酸的能力。而次黃嘌呤和脫氧胸苷則使攜帶功能性 HGPRT 基因的細(xì)胞能夠通過補(bǔ)救途徑存活。因此，源自 B 淋巴細(xì)胞并攜帶功能性 HGPRT 基因的雜交細(xì)胞得以存活，而未融合的 B 細(xì)胞和惡性腫瘤細(xì)胞則被淘汰。

對(duì)雜交瘤進(jìn)行篩選，挑選出能產(chǎn)生針對(duì)抗原特定表位抗體的克隆。

在大型培養(yǎng)容器或培養(yǎng)瓶中克隆并增殖雜交瘤細(xì)胞。

目前，單克隆抗體可通過體外和體內(nèi)兩種方式生產(chǎn)。在體內(nèi)，通常使用小鼠腹水法生產(chǎn)單克隆抗體；而在體外，則是培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞并利用培養(yǎng)基分離單克隆抗體。

圖 1. 雜交瘤技術(shù)的應(yīng)用。(Mitra, S., et al., 2021)

Creative Biolabs 很高興能分享我們?cè)陔s交瘤領(lǐng)域的專業(yè)知識(shí)與經(jīng)驗(yàn)，以促進(jìn)客戶的研究。

雜交瘤技術(shù)的優(yōu)勢(shì)

1.產(chǎn)生高純度和高特異性的抗體。

2.高度可重現(xiàn)且可擴(kuò)展。

3.用于進(jìn)行高靈敏度和高特異性的檢測(cè)。

4.抗體可以通過體外方法獲得。

5.抗原或免疫原的純度并非必要條件。

6.有助于識(shí)別針對(duì)特定抗原的正確克隆。

7.體內(nèi)抗體的產(chǎn)生確保了可變結(jié)構(gòu)域和恒定結(jié)構(gòu)域的混合形成。所產(chǎn)生的抗體對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的表位具有高親和力。

8.一旦雜交瘤細(xì)胞穩(wěn)定，即可獲很多供應(yīng)的高性價(jià)比均質(zhì)抗體。

9.廣泛應(yīng)用于疫苗生產(chǎn)研究。

10.雜交瘤抗體生產(chǎn)廣泛應(yīng)用于診斷和治療程序中。

參考聲明

所列的所有服務(wù)和產(chǎn)品均僅供研究使用（For Research Use Only），不得用于任何診斷或治療用途。

更多產(chǎn)品信息，請(qǐng)聯(lián)系中國區(qū)域代理商：上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司

（注：本文內(nèi)容基于品牌公開資料及行業(yè)常規(guī)信息整理，具體以品牌信息文檔為準(zhǔn)。）