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Progen PRAAV9 AAV9 Titration ELISA試劑盒中文介紹

更新時間:2026-04-28      點擊次數:31

一、 產品描述

• 英文全名:AAV9 Titration ELISA

• 中文全名:腺相關病毒9型滴度定量檢測試劑盒

• 國際貨號:PRAAV9

• 品牌歸屬:德國 Progen Biotechnik GmbH

• 產品規格:96次反應/盒(含標準品及配套試劑)

• 核心用途:用于精準測定腺相關病毒9型(AAV9)的感染性滴度或物理滴度。

本產品由德國Progen公司進口,專為科研及生物制藥領域設計,能夠在無需昂貴儀器和復雜操作的前提下,為AAV9載體提供高效、穩定的定量分析解決方案。

image.png

二、 產品核心特點

1. 高特異性:采用抗AAV9衣殼蛋白的單克隆抗體,有效避免與其他AAV血清型(如AAV1-AAV8、AAV-DJ等)發生交叉反應,確保檢測背景極低。

2. 操作便捷:預包被的微孔板與即用型試劑大大縮短了實驗準備時間,整個流程可在數小時內完成。

3. 寬線性范圍:標準曲線覆蓋至少3個數量級,能夠準確定量高濃度或低濃度的病毒樣本。

4. 優秀的重現性:板內與板間變異系數(CV%)均嚴格控制在10%以內,保障每一次實驗數據的可靠性。

5. 高靈敏度:低檢測限可達 10^7 病毒顆粒(vp)/mL級別,滿足大多數體內外基因遞送實驗的滴度測定需求。


三、 儲存條件與試劑穩定性

• 未開封試劑盒儲存:請置于 2-8°C 避光保存,有效期詳見外包裝標簽(通常為12個月)。

• 開封后保存建議:

 • 捕獲抗體預包被微孔板:密封放回 2-8°C,避免板條受潮,建議在 4 周內使用完畢。

 • 酶結合物(HRP標記):切勿冷凍,短期(1-2周)存放于 2-8°C,長期建議根據單次用量分裝后置于 -20°C 凍存。

 • 檢測緩沖液與洗液:室溫密閉保存,若結晶析出,使用前預熱至 37°C 并充分混勻。

• 工作液穩定性:配制后的底物液(TMB)需在 30 分鐘內避光使用;終止液性質穩定,但需注意其強酸性。


四、 工作原理(雙抗體夾心ELISA法)

本試劑盒基于經典的雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定(Sandwich ELISA)原理,專門用于特異性識別并結合完整的AAV9病毒顆粒。

1. 固相捕獲:微孔板中預包被了高親和力的抗AAV9特異性單克隆抗體。當加入待測樣本或標準品時,樣本中的AAV9病毒顆粒會被這些抗體特異性捕獲并固定在孔板上。

2. 孵育結合:在適宜的溫度下孵育一定時間,使抗原-抗體結合達到平衡,形成“固相抗體-AAV9抗原"復合物。

3. 酶標二抗結合:洗去未結合的物質后,加入帶有辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體。該二抗會特異性地結合到已被捕獲的AAV9衣殼蛋白的另一位點,形成“固相抗體-AAV9-HRP標記二抗"的免疫復合物。

4. 信號放大與檢測:再次洗滌去除游離的酶標二抗后,加入顯色底物(通常為TMB)。HRP催化無色底物氧化生成藍色物質,加入終止液后反應液變為黃色。

5. 定量分析:使用酶標儀在 450 nm 波長處測定各孔的吸光度值(OD值)。吸光度與樣本中AAV9的濃度成正比。通過將樣本的OD值代入標準曲線,即可精確計算出樣本中AAV9的絕對滴度。


五、 解決的核心實驗痛點

在基因治療與基礎生命科學研究中,腺相關病毒(AAV)是常用的基因遞送載體之一。然而,科研人員在使用AAV9進行實驗時常常面臨以下難題:

1. 傳統滴度測定方法耗時長:如細胞轉染后通過熒光斑點數(IU/mL)測定感染性滴度,通常需要 48-72 小時才能出結果,嚴重拖慢實驗進度。

2. qPCR法受雜質干擾大:基于DNA提取的qPCR法不僅操作繁瑣,且極易受到樣本中殘留的質粒DNA、游離基因組DNA污染,導致滴度被嚴重高估。

3. 昂貴設備依賴性強:如透射電子顯微鏡(TEM)或分析型超速離心機(AUC)雖然能測衣殼滴度,但設備普及率低且維護成本高。

4. 不同血清型交叉反應導致數據失真:廣譜型檢測試劑在面對特定血清型時靈敏度不足。

本產品的解決方案:

本ELISA試劑盒彌補了上述缺陷。它能在 4-5 小時內提供基于衣殼蛋白的準確定量,不受樣本中外源DNA干擾,無需大型儀器設備,僅需一臺常規酶標儀即可獲得高度可重復的滴度數據,極大提升了AAV9載體的質控效率和下游實驗(如動物體內注射、細胞感染)的劑量可控性。


六、 詳細使用方法與操作流程

實驗前準備:

• 將所有試劑盒組分及待測樣本恢復至室溫(18-25°C),約需 30 分鐘。

• 準備足量去離子水或超純水用于配制洗滌液。

• 根據樣本預估濃度,準備合適的稀釋緩沖液(推薦使用含1% BSA的PBS)。

標準品稀釋:

• 試劑盒提供已知濃度的AAV9標準品。取適量標準品,按倍比稀釋法(如1:2或1:5)連續稀釋6個點,制備標準曲線。低濃度點作為空白對照。

樣本預處理與稀釋:

• 對于細胞上清液,可直接取樣或經低速離心去除細胞碎片后取樣。

• 對于濃縮的病毒液,需先進行適度稀釋(如 1:100 或 1:1000),使其預期濃度落在標準曲線的線性范圍內。建議每個樣本做2-3個重復孔。

操作步驟:

1. 加樣與孵育:向微孔板中加入 100 µL 不同濃度的標準品或稀釋后的待測樣本。封板膜密封,室溫下在搖床上輕柔振蕩孵育 2 小時。

2. 洗滌:棄去孔內液體,每孔加入 300 µL 洗滌緩沖液,靜置 30 秒后棄去。重復此步驟 3-5 次。最后在吸水紙上拍干微孔板。

3. 加酶結合物:每孔加入 100 µL 稀釋好的HRP標記檢測抗體。封板后室溫避光孵育 1 小時。

4. 再次洗滌:重復步驟2的洗滌過程,去除未結合的酶標抗體。

5. 顯色:每孔加入 100 µL TMB底物溶液,室溫避光靜置 15-20 分鐘。此時可觀察到陽性孔逐漸顯現藍色。

6. 終止反應:每孔加入 50 µL 終止液(通常為1M H?SO?),此時溶液顏色由藍轉為黃色。

7. 讀數計算:在 15 分鐘內,使用酶標儀測定 450 nm 處的吸光度值(OD???)。以標準品濃度為橫坐標,OD值為縱坐標繪制標準曲線(通常采用四參數邏輯回歸擬合)。將樣本的OD值帶入方程,計算出樣本的實際濃度,再乘以稀釋倍數即為原始樣本中的AAV9滴度。


七、 常見問題分析與解決方案

• 問題1:標準曲線線性不佳,R2值低于0.99

 • 原因分析:標準品降解或稀釋操作誤差累積;加樣時產生氣泡;孵育溫度不均勻。

 • 解決方案:確保標準品分裝保存,避免反復凍融;使用高精度移液器并定期校準;加樣時槍頭貼壁緩慢打出液體,避免氣泡;確保孵育環境(如室溫)恒定。

• 問題2:背景值過高(空白孔OD值偏高)

 • 原因分析:洗滌不夠;底物污染;封閉效果不足。

 • 解決方案:增加洗滌次數至5次,并確保每次洗滌后在吸水紙上充分拍干;檢查洗液是否新鮮配制;若樣本基質復雜,可在加標準品前增加1小時的封閉步驟(如使用5%脫脂奶粉或1% BSA)。

• 問題3:樣本復孔間變異系數(CV%)過大

 • 原因分析:樣本未充分混勻;加樣體積不準;微孔板邊緣效應。

 • 解決方案:加樣前充分渦旋并離心樣本;避免在微孔板最外圍一圈加樣(可用無菌水填充邊緣孔);確保酶標儀濾光片干凈無劃痕。

• 問題4:測得的滴度遠低于預期

 • 原因分析:樣本發生聚集;保存不當導致病毒失活降解;稀釋倍數計算錯誤。

 • 解決方案:樣本使用前進行短暫超聲處理或加入少量非離子型去垢劑(如Triton X-100至終濃度0.1%)打散聚集體;避免反復凍融;重新精確測定稀釋因子。


關鍵詞:腺相關病毒滴度測定、AAV9 ELISA試劑盒、病毒載體定量檢測、Progen AAV9滴定、AAV9空殼率檢測、快速AAV滴度測定、無血清AAV9滴度、AAV9物理滴度測定、基因治療載體質控、AAV9感染性滴度、雙抗體夾心ELISA、高特異性AAV9檢測、AAV9定量試劑盒、低成本AAV滴度、免洗AAV檢測試劑盒、AAV9衣殼蛋白定量、生物制藥AAV滴度、AAV9標準品、AAV9 HRP檢測抗體、高靈敏度病毒滴度。


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(注:本文內容基于品牌公開資料及行業常規信息整理,具體以品牌信息文檔為準。)


??Progen熱賣產品

貨號

品名

規格

品牌

PRAAV8

AAV8 Titration ELISA

96 tests

Progen

PRAAV9

AAV9 Titration ELISA

96 tests

Progen

690014S

anti-DNA, AC-30-10, mouse mab

0.2 mL (100 ug/mL)

Progen

PRAAV2R

AAV2 Titration ELISA 2.0R

96T

Progen

PRHYPE-XS

Hyperphage M13 K07ΔpIII

2ml

Progen

61014

anti-DNA mouse monoclonal, AC-30-10, lyophilized,

purified (reactivity to all species) Dot Blots , ICC/IF , IHC

100ug

Progen

610160

anti-AAV8 (intact particle) mouse monoclonal, ADK8, lyophilized,

purified (reactivity to AAV8) Dot Blots , ELISA , ICC/IF , IHC , IP , Neutralization Assay

50ug

Progen

PRATV

AAV2 Titration ELISA

96T

Progen

690162

anti-AAV9, ADK9, mouse mab, liquid

1 mL (50 ug/mL)

Progen

610298

anti-AAV2, A20, mouse recombinant ab

50ug

Progen

61084-250ul

anti-AAV VP1/VP2/VP3 (rabbit polyclonal)

250ul

Progen

610178

anti-AAV9, ADK9-1R, mouse recombinant ab

50ug

Progen

PRAAV5

AAV5 Titration ELISA

96T

Progen

61055

aanti-AAV2 (intact particle) mouse monoclonal, A20, lyophilized, purified

50ug

Progen

PRAAV6

AAV6 Titration ELISA

96T

Progen

690058S

anti-AAV VP1/VP2/VP3 mouse monoclonal, B1 sample size

200ul(50ug/ml)

Progen

PRHYPE

Hyperphage M13 K07ΔpIII

5 x 2 mL

Progen

66V020

AAV2 empty capsids

100ul

Progen

66V080

AAV8 empty capsids

100ul

Progen

65158

anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab

5mL

Progen

610160S

anti-AAV8, ADK8, mouse mab, sample 10 μg

10ug

Progen

GP-N2

anti-Nephrin, guinea pig pab

100uL

Progen

615162

anti-AAV9 Biotin, ADK9, mouse mab

750uL

Progen

PRAAV9XP

AAV9 Xpress ELISA

96T

Progen

PRAAV8XP

AAV8 Xpress ELISA

96T

Progen

610137

anti-AAV5, rabbit pab

250uL

Progen

610149

anti-AAV-5, ADK5b, mouse mab

50ug

Progen

690298

anti-AAV2, mouse recombinant ab, A20R

1ml(50ug/ml)

Progen

61069

anti-AAV Replicase, 303.9, mouse mab

50ug

Progen

615160

anti-AAV8 Biotin, ADK8, mouse mab

750uL

Progen

GP29-100uL

anti-Perilipin N-terminus, guinea pig pab

100uL

Progen

66V090

AAV9 empty capsids

100ul

Progen

610148

anti-AAV-5, ADK5a, mouse mab

50ug

Progen

610159

anti-AAV6, ADK6, mouse mab

50ug

Progen

PRAAV2XP

AAV2 Xpress ELISA

96T

Progen

690162S

anti-AAV9, ADK9, Mouse mAk, liquid, Sample

200uL(50ug/mL)

Progen

PRAAV1

AAV1 Titration ELISA

96T

Progen

690094S

anti-Synaptopodin, G1D4, mouse mab

0.2ml(50ug/ml)

Progen

690058

anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab, liquid

1 ml (50 ug/ml)

Progen

PR3005

Phagemid pSEX81

5ug

Progen

66V060

AAV6 empty capsids

100ul

Progen

16045

anti-HDC, rabbit pab

50uL

Progen

72008

AAV8 VP1 + VP2 + VP3, recombinant proteins, set

10ug

Progen

PRAAV2-C

AAV2 ELISA Control

1 vial

Progen

66V050

AAV5 empty capsids

100ul

Progen

gp40-100ul

anti-Perilipin 2 (N-terminus aa 1-29) guinea pig polyclonal serum

100ul

Progen

66V010

AAV1 empty capsids

100ul

Progen

PRAAV9-C

AAV9 ELISA Control

1 vial

Progen

BK610149

anti-AAV-5, ADK5b, mouse mab

1mg

Progen

690383

anti-pan AAV, 1C4M, mouse chimeric ab

1ml(50ug/ml)

Progen

BK61055

anti-AAV-2, A20, mouse mab

1mg

Progen

61058

anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab

50ug

Progen

61058-488

anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab, AFDyeT

50 ug (100 ul)

Progen

61058S

anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab, sample

10ug

Progen

615298

anti-AAV2 Biotin, A20R, mouse mab

750uL

Progen

690014

anti-DNA mouse monoclonal, AC-30-10, liquid, purified

1ml(100ug/ml)

Progen

GP31

anti-Perilipin 5 C-terminus, guinea pig pab

100uL

Progen

65155

anti-AAV-2, A20, mouse mab

5mL

Progen

GP41

anti-Adipophilin C-terminus, guinea pig pab

100uL

Progen

651162

anti-AAV9, ADK9, mouse mab

5mL

Progen

70011

anti-Perilipin 2,3,5 sample set

600 ul

Progen

692378S

anti-AAV9, human chimeric, ADK9-h1, sample

200 ul (50 ug/ml)

Progen

692373-1ml

anti-pan AAV (intact particle) human recombinant, 1C4H

1 ml (50 ug/ml)

Progen

90002

anti-mouse IgG goat polyclonal, HRP conjugate 100 μg

100ug

Progen

90002-100ug

anti-mouse IgG goat polyclonal, HRP conjugate

100ug

Progen

AAV-SAMP

antibody buffer 20ml buffer formulation: PBS, 0,5 M NaCl, 0,25 M L-Arginine, pH 7.4

1pc

Progen

690298S

anti-AAV2, mouse recombinant ab, A20R, sample

200ul(50ug/ml)

Progen

690160

anti-AAV8 (intact particle) mouse monoclonal, ADK8

1 ml (50 ug/ml)

Progen

690159S

anti-AAV6, mouse monoclonal, ADK6, sample

200 ul (50 ug/ml)

Progen

690150

anti-AAV1 (intact particle) mouse monoclonal, ADK1a

1 ml (50 ug/ml)

Progen

690148

anti-AAV-5, ADK5a, mouse mab

1ml(50ug/ml)

Progen

690055S

anti-AAV2, A20, mouse mab

200ul(50ug/ml)

Progen

690055

anti-AAV2, A20, mouse mab

1ml(50ug/ml)

Progen

690038

anti-Keratin K8, Ks8.7, mouse mab

1mL(50ug/mL)

Progen

GP-SH3

anti-Calicin, guinea pig pab

100uL

Progen

690028

anti-Keratin K18, Ks18.04, mouse mab

1mL(50ug/mL)

Progen

GP34-100uL

anti-Perilipin 4 C-terminus, guinea pig pab

100uL

Progen

66V030

AAV3 empty capsids

100ul

Progen

640825

AAV2 VP3, recombinant protein

10ug(100ug/ml)

Progen

PRAAV10

AAVrh10 Titration ELISA

96T

Progen

61058-647

anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab, AFDyeT

50ug (100 ul)

Progen

61056

anti-AAV VP1, A1, mouse mab

50ug

Progen

610298S

anti-AAV2, A20R, mouse recombinant ab, sample

10ug

Progen

PR6103

LNP Protein Delivery Kit

1 kit

Progen

PRAAV3-C

AAV3 ELISA Control

1vial

Progen

PRAAV3R

AAV3 Titration ELISA 2.0R

96T

Progen

610150

anti-AAV1, ADK1a, mouse mab

50ug

Progen

610149S

anti-AAV5, ADK5b, mouse mab, sample

10ug

Progen

61094

anti-Synaptopodin, G1D4, mouse mab

50ug

Progen

PR5223

Dip'n'Check AAV2 and AAV3

25Ttripes

Progen

PR5208

Dip'n'Check AAV8

25Ttripes

Progen

615148

anti-AAV5 Biotin, ADK5a, mouse mab

750uL

Progen

61555

anti-AAV-2 Biotin, A20, mouse mab

750uL

Progen

640823

AAV2 VP1, recombinant protein

10ug(100ug/ml)

Progen

640824

AAV2 VP2, recombinant protein

10ug(100ug/ml)

Progen

651160

anti-AAV8, ADK8, mouse mab

5mL

Progen

PRAAV6XP

AAV6 Xpress ELISA

96T

Progen

PRAAV8-C

AAV8 ELISA Control

1vial

Progen

GP62-C

anti-p62 Protein C-terminus, guinea pig pab

100uL

Progen

GP53

anti-Vimentin guinea pig polyclonal, serum (reactivity to bovine , human , mouse) ICC/IF , IHC , WB

100uL

Progen




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