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Favorgen FABGK 001-1說明書

更新時間:2018-10-10      點擊次數:2886

 

Favorgen位于中國臺灣國家生物技術園區。它通過自動化系統建立了ISO合格工廠,
生產高質量的分子生物學產品和臨床化學試劑。目前,Favorgen在美國,中國,韓國和丹麥設立分支機構,并在30多個國家設立了分銷網絡。自成立以來,Favorgen已經在其先進的生產設施上投入了大量資金,以競爭力的價格為客戶提供高質量的產品。Favorgen致力于通過與學術和行業合作伙伴的內部和合作開展研究,以不斷提供高質量的創新產品。

Nucleic-acids extraction Genomic DNA Extraction

核酸提取基因組DNA提取

Genomic DNA Extraction Blood DNA Mini / Midi / Maxi Kit

FavorPrepTM Blood Genomic DNA Extraction Mini Kit

 

Cat.No. : FABGK 000, 4 Preps

FABGK 001, 50 Preps

FABGK 001-1, 100 Preps

FABGK 001-2, 300 Preps

(For Research Use Only)

 

 

 

Kit Contents:

 

FABGK 000

sample)

 

FABGK 001

 

FABGK 001-1

 

FABGK 001-2

 

 

* Preparation of W1 Buffer, Wash Buffer and proteinase K solution for first use:

Cat. No:

FABGK000

(4 preps)

FABGK001

(50 preps)

FABGK001-1

(100 preps)

FABGK001-2

(300 preps)

ethanol volume for W1Buffer *

0.5 ml

8 ml

16 ml

45 ml

ethanol volume for Wash Buffer **

4 ml

40 ml

80 ml

200 ml

ddH2O volume for Proteinase K solution

0.1 ml

1.1 ml

1.1 ml

1.1 ml

 

規格:

 

原理:自旋柱(硅膠膜)

 

樣本:全血、血清、血漿、體液多可培養5×10 6細胞。

 

手術時間:<30分鐘

 

結合容量:高可達60克/柱DNA產量:4~8微克/200升全血

 

 

 

 

 

 

 

 

 

重要說明:

 

本系統中提供的緩沖區包含刺激物。在處理這些緩沖器時,戴上手套和實驗室外套。

 

將蛋白酶K管保存在-20°C,然后再加入所需體積的無菌ddH2O到蛋白酶K管中,制成10毫克/毫升的原液。旋渦,確保蛋白酶K是復合的 泰利解散了。將庫存溶液存放在4°C。

 

次使用時,在W1緩沖液和洗滌緩沖液中加入所需體積乙醇(96%-100%)。

 

手術前將干洗或水浴預熱至60°C。

 

所有的離心步驟都是在微型離心機中全速進行的(~18,000 x g)。

General Protocol:

“一般性議定書”:

 

提示:準備一個干洗浴或水浴至60°C浴進行第4步。預熱洗脫緩沖液至65°C為第13步(洗脫步驟)。

 

在開始以下步驟之前,請閱讀重要說明。

 

將多達200毫升的樣本(全血、血清、血漿、體液、布菲大衣)轉移到微離心管(未提供)。

 

如果樣品體積小于200毫升,加入適當的PBS體積。

 

(可選):如果需要無RNA的基因組DNA,在樣品中加入4升100 mg/ml的RNase A,在室溫下孵育2 min。

 

在樣品中加入20L蛋白酶K和200μl FABG緩沖液。通過脈沖旋渦充分混合.

 

不要直接將蛋白酶K添加到FABG緩沖液中。

 

在60℃下孵育15分鐘,以提取樣品。在孵化過程中,每隔3-5分鐘將樣品旋渦一次.

 

簡單地旋轉管子以去除從iid內部滴下的液滴。

 

在樣品中加入200升乙醇(96%-100%)。用脈沖旋渦*攪拌10秒。

 

簡單地旋轉管子以去除從iid內部滴下的液滴。

 

將FABG微型柱放置到收集管上。將混合物(包括任何沉淀物)小心地轉移到FABG微型柱上。離心機在6,000 x g下離心1分鐘,然后將FABG微型柱放置在nee上。 W收集管。

 

加入400升W1緩沖器到FABG迷你柱和離心機全速(18,000 x g)30秒,然后丟棄流過。

 

加入750升洗滌緩沖器到FABG迷你柱和離心機全速30秒,然后丟棄流過。

 

確保乙醇在次打開時加入到洗滌緩沖液中。

 

全速離心3分鐘,干燥柱。

 

重要的一步!這一步將避免殘留液體對后續酶反應的抑制。

 

將FABG微型柱放置到發射管上。

 

在FABG微型柱膜中心加入50~200μl的洗脫緩沖液或DDH_2O(pH7.5-9.0)。將FABG微型柱站立3分鐘。

 

重要的一步!為了進行有效的洗脫,要確保洗脫液被分配到膜中心并被*吸收。

 

全速離心1分鐘以逃避總DNA。

 

1. 將總DNA儲存在4°C或-20°C。特別議定書:

 

1.培養細胞

 

2. 收獲細胞

 

3. 懸浮培養細胞

 

4. ?.將適當數量的細胞(多5×10)轉移到1.5毫升的微離心管中。??。300×g離心5 min。

 

5. ?.仔細而*地移除上清液。

 

6. 單層細胞

 

7. ?.通過胰蛋白酶化或使用細胞刮刀將細胞從盤子或燒瓶中分離出來。

 

8. ??.將適當數量的細胞(多5×106)轉移到1.5毫升的微離心管中。

 

9. ?.300×g離心5 min。

 

10. ?v.仔細而*地移除上清液。

 

11. 再生細胞顆粒在PBS中的終體積為200毫升。

 

12. 從第二步開始遵循“一般議定書”。

 

布瓦大衣的制備

 

將全血在3,300 x g下在室溫下離心10分鐘,可得到三個不同的組分:上清層為血漿;中間層為布皮,內含錐形。 額定紅細胞;下層含有濃縮的紅細胞。從步開始處理布菲大衣的一般協議。

 

從布菲皮毛中提取總DNA將比同等體積的全血產生5-10倍的DNA。

 

Troubleshooting

 

Possible reasons

Solutions

Low or no yield of genomic DNA

Low amount of cells in the sample

Concentrate a larger volume of a new sample to 200 ul. If the sample is whole blood, prepare buffy coat

Poor cell lysis

Poor cell lysis because of insufficient Proteinase K activity

Repeat the extraction procedure with a new sample. Use a fresh or well- stored Proteinase K stock solution.

Poor cell lysis because of insufficient mixing with FABG buffer

Repeat the extraction procedure with a new sample. Mix the sample and FABG Buffer immediately and thoroughly by pulse-vortexing.

Poor cell lysis because of insufficient incubation time

Repeat the extraction procedure with a new sample. Extend the incubation time and make sure that no residual particulates remain.

Ethanol is not added into the lysate before transferring into FABG Mini Column

Repeat the extraction procedure with a new sample.

Incorrect preparation of Wash Buffer

Ethanol is not added into Wash Buffer when first open

Make sure that the correct volumes of ethanol (96- 100 %) is added into Wash Buffer when first open. Repeat the extraction procedure with a new sample.

The volume or the percentage of ethanol is not correct before adding into Wash Buffer

Make sure that the correct volumes of ethanol (96- 100 %) is added into Wash Buffer when first open. Repeat the extraction procedure with a new sample.

Elution of genomic DNA is not efficient

pH of water (ddH2O) for elution is acidic

Make sure the pH of ddH2O is between 7.5- 9.0.

Use Elution Buffer (provided) for elution.

Elution Buffer or ddH2O is not completely absorbed by column membrane

After Elution Buffer or ddH2O is added, stand the FABG Mini Column for 5 min before centrifugation.

Column is clogged

Blood sample contains clots

Repeat the extraction procedure with a new sample. Mix the blood sample well with anti-coagulant to prevent formation of blood clots.

Sample is too viscous

Reduce the sample volume.

Degradation of elutated DNA

Sample is old

Always use fresh or well-stored sample for genomic DNA extraction.

Buffer for gel electrophoresis contaminated with DNase

Use fresh running buffer for gel electrophoresis.

 

 

 

 

基因組DNA提取血液DNA Mini / Midi / Maxi試劑盒

FABGK 000

FavorPrep™血液/培養細胞基因組DNA提取迷你試劑盒

4個準備。

蛋白酶K粉末
FATL緩沖液
FABG緩沖液
W1緩沖液
洗滌緩沖液(濃)
洗脫緩沖液
FABG迷你柱
2ml收集管
1.5ml洗脫管

在室溫(15~25℃)下保存2年。
除蛋白酶K粉外,貯存于4℃。

FABGK 001

50個準備。

FABGK 001-1

100個準備。

FABGK 001-2

300個準備。

FABGK 100

FavorPrep™血液/培養細胞基因組DNA提取迷你試劑盒

100個準備。

RBC裂解緩沖液 FATL緩沖液 FABG緩沖液 W1緩沖液 洗滌緩沖液(濃) 洗脫緩沖液FABG迷你柱 2ml收集管 




 

在室溫(15~25℃)下保存2年。
除蛋白酶K粉外,貯存于4℃。

FABGK 300

300個準備。

 

 

FABGK 002-S

FavorPrep血液/培養細胞基因組DNA提取Midi試劑盒

2個準備。

蛋白酶K粉末
FABG緩沖液
洗滌緩沖液W1(濃)
洗滌緩沖液W2(濃)
洗脫緩沖液
FABG Midi柱
15 ml洗脫管

在室溫(15~25℃)下保存2年。

除蛋白酶K粉外,貯存于4℃。

FABGK 002

20個準備。

FABGK000-MAXI

FavorPrep™血液/培養細胞基因組DNA提取Maxi試劑盒

2個準備。

Proteinase K Powder 
FABG Buffer 
W1 Buffer 
Wash Buffer(濃)
洗脫緩沖液
FABG Maxi Columns 
50 ml Elution tubes

在室溫(15~25℃)下保存2年。
除蛋白酶K粉外,貯存于4℃。

 

 

 

 

 

 

 

 

上海起發是實驗試劑一站式采購服務商

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